Каква е целта на използването на ddNTP?
Каква е целта на използването на ddNTP?

Видео: Каква е целта на използването на ddNTP?

Видео: Каква е целта на използването на ddNTP?
Видео: Секвенирование по Сэнгеру 2024, Ноември
Anonim

DdNTP отнася се до Дидезоксинуклеотиди трифосфати, които се използват в дидеокси метода на Sanger за производство на различни дължини на ДНК вериги за ДНК секвениране. Това води до прекратяване на процеса на ДНК полимеризация (или удължаване на ДНК), тъй като този процес се нуждае от 3'-OH група, за да продължи.

Поради това защо ddNTP се използват при секвениране?

Дидезоксинуклеотиди са инхибитори на удължаване на веригата на ДНК полимераза, използван в метода на Сангер за ДНК секвениране . Дидезоксирибонуклеотидите нямат 3' хидроксилна група, следователно не може да настъпи по-нататъшно удължаване на веригата, след като този дидеоксинуклеотид е във веригата. Това може да доведе до прекратяване на ДНК последователност.

По подобен начин ddNTP се свързват ли към dNTP? Едно или повече от dNTPs са радиоактивно маркирани, за да се визуализират продуктите на репликация. Накрая всяка тръба получава един от четирите специални нуклеотида, наречени дидеоксинуклеотиди ( ddNTPs ). Въпреки това, веднъж вградена, ДНК полимеразата не може допълнително да удължи веригата, защото се нуждае от 3'-OH за прикачете към следващия нуклеотид.

По подобен начин някой може да попита как ddNTP спират реакцията на секвениране?

Когато присъства в малки количества в последователни реакции , дидезоксирибонуклеозид трифосфат ( ddNTPs ) прекрати реакция на секвениране на различни позиции в растящите ДНК вериги. ddNTP спират реакцията на секвениране защото те: причиняват падане на ДНК полимеразата от шаблонната верига. ° С.

Каква техника, включваща дидеоксинуклеотиди, може да се използва?

Последователността на Сангер е a метод на ДНК секвениране на базата на селективното включване на завършващи веригата дидеоксинуклеотиди чрез ДНК полимераза по време на ин витро репликация на ДНК. Разработено от Фредерик Сангер и колеги през 1977 г., той е най-широко разпространеният използван секвениране метод за около 40 години.

Препоръчано: