Какво се случва, ако добавите твърде много рестрикционен ензим?
Какво се случва, ако добавите твърде много рестрикционен ензим?

Видео: Какво се случва, ако добавите твърде много рестрикционен ензим?

Видео: Какво се случва, ако добавите твърде много рестрикционен ензим?
Видео: Ассимилятор // Пищеварительные ферменты // Энзимы 2024, Ноември
Anonim

Може да възникне непълно храносмилане когато твърде много или също малко ензим се използва. В наличие на замърсители в на ДНК проба мога инхибират ензимите , което също води до непълно храносмилане. някои рестрикционни ензими изискват кофактори за пълна активност.

Освен това защо рестрикционните ензими се добавят последни?

В рестрикционен ензим обикновено е последно съставна част добави към реакция, за да се гарантира, че не е изложен на екстремни условия. Сглобената реакция трябва да се смеси след това ензим допълнение. Смесете всички разтвори, съдържащи рестрикционни ензими внимателно, за да се избегне ензим инактивиране.

Освен това, как може да се подобри храносмилането на рестрикционните ензими? Използвайте не повече от препоръчаното ензим количество (например 10 единици от ензим на микрограм ДНК). Намалете количеството на ензим в реакцията, ако е необходимо. Избягвайте продължителна инкубация на храносмилане реакция. Използвайте препоръчания реакционен буфер.

Знайте също, защо рестрикционният ензим не би отрязал?

Подготовка на ДНК за разцепване Трябва да не съдържа замърсители като фенол, хлороформ, алкохол, EDTA, детергенти или прекомерни соли, всички от които могат да повлияят рестрикционен ензим дейност. Ако присъства инхибитор (често сол, EDTA или фенол), контролната ДНК ще го направи не се режат след смесване.

Защо количеството ензим може да предизвика звездна активност?

Звездната дейност е отпускането или промяната на спецификата на ограничението ензим медиирано разцепване на ДНК, че мога възникват при условия на реакция, които се различават значително от оптималните за ензим . Звездната дейност може се случва поради наличието на Mg2+, като е вижда се в HindIII, например.

Препоръчано: