Как избирате клонинги?

2024 Автор: Stanley Ellington | [email protected]. Последно модифициран: 2023-12-16 00:13

Кога избирайки а клонинг , уверете се, че корените са силни, бели и нетърпеливо стърчащи от средата за растеж. Ако корените са кафяви и набръчкани или по друг начин изглеждат неактивни, поставете го обратно и потърсете по-добър.

Освен това, как се клонира една клетка?

1. Пребройте клетките, за да поставите ~16 000 клетки в първата ямка (A1) на 96-ямкова плака, съдържаща 200 µL среда.
2. Отстранете 100 µL от клетки, съдържащи A1, и смесете с B1, като пипетирате нагоре и надолу 3 пъти, за да се смесят добре, преди да отстраните 100 µL и да смесите с C1 и т.н.

Също така, как избирате колония от клетки на бозайник? Поставете плочата под микроскоп, за да изберете недиференцирани здрави колонии . Изберете колонии с помощта на пипета P-20, настроена на 10 ul. Внимателно изберете а колония без да разбивате колония в сингъл клетки и го прехвърлете в 96-ямкова плака с трипсин. Пипетирайте нагоре и надолу няколко пъти, за да разпръснете колония.

Съответно, как използвате цилиндър за клонинг?

Използвайки стерилни средни щипци, вземете a цилиндър за клониране . Внимателно натиснете плоското дъно на цилиндър в гладката силиконова грес и отстранете с внезапно вертикално движение. Ако се направи правилно, това ще осигури равномерно разпределение на мазнините по дъното на цилиндър . Нагласи цилиндър над колония.

Как избирате колонии за стабилни клетъчни линии?

Протоколът за генериране на стабилни клетъчни линии изисква няколко стъпки, както е показано по-долу:

1. Генерирайте крива на убиване, за да определите оптималната концентрация на антибиотик за подбор.
2. Трансфектирайте клетки с желаната плазмидна конструкция(и)
3. Изберете и разширете стабилни поликлонални колонии.
4. Идентифицирайте единични клонинги чрез ограничено разреждане и разширяване.